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熒光分光光度法在食品中維生素C含量測定上的應用

日期: 2018-12-11
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摘要:?熒光分光光度法是對熒光物質進行定性和定量的有效方法。目前國家標准對于測定食品中維生素C含量的方法以熒光分光光度法爲主。

本文以婴幼儿乳品为例,依据国家标准GB 5413.18-2010《食品安一夜七次郎家标准 婴幼儿食品和乳品中维生素C的测定》,应用港东F-380型荧光分光光度计对婴幼儿乳品中维生素C的含量进行测定。结果证明此方法操作简便,线性良好是测定食品中维生素C含量的理想方法。?

關鍵詞:??荧光分光光度法 ?维生素C ?抗坏血酸 ?食品 ?婴幼儿乳品


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·?原理

維生素C(抗壞血酸)在活性炭存在下氧化成脫氫抗壞血酸,它與鄰苯二胺(OPDA)反應生成熒光物質(喹唔啉),用熒光分光光度計測定其熒光強度,其熒光強度與維生素C的濃度成正比。

脫氫抗壞血酸與硼酸可形成複合物不與鄰苯二胺反應,以此排除試樣中熒光雜質産生的幹擾。

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·?實驗條件

儀器及附件:

天津港东 F-380 型荧光分光光度计

熒光石英比色皿

分析條件:

激發波長:350nm

發射波長:430nm

藥品:

澱粉酶、偏磷酸、乙酸、活性炭、鹽酸、亞鐵氰化鉀、結晶乙酸鈉、硼酸、鄰苯二胺、維生素C標准品。

其它:

分析天平(0.0001g)、烤箱、水浴鍋、80~200目篩子、研缽、抽濾裝置、稱量紙、藥勺、量筒、容量瓶、具塞三角瓶、漏鬥、濾紙、移液管、具塞比色管、燒杯、擦鏡

紙、玻璃棒、膠頭滴管等。

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·?實驗流程


熒光分光光度法在食品中維生素C含量測定上的應用


樣品前處理:

樣品前處理步驟如下圖所示:

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熒光分光光度法在食品中維生素C含量測定上的應用

图1 ?样品前处理流程图

備注:樣品稱樣量依據其本身維生素C含量(約2mg)而定。澱粉酶活力爲1.5U/mg,根據活力單位大小調節用量。


樣品待測液制備:

樣品經前處理後還需進行進一步的處理才可以上機進行檢測。

樣品待測液制備步驟如下圖所示:

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熒光分光光度法在食品中維生素C含量測定上的應用

图2 ?样品空白溶液待测液和样品溶液待测液配制流程图

備注:樣品稱樣量依據其本身維生素C含量(約2mg)而定。澱粉酶活力爲1.5U/mg,根據活力單位大小調節用量。


標准樣品待測液制備:

精密稱取0.050g維生素C標准品,用偏磷酸-乙酸溶液A溶解並定容至50mL,再准確吸取10.0mL該溶液用偏磷酸-乙酸溶液A稀釋並定容至100mL,配制成100μg/mL的標准溶液。

准確吸取經過處理的VC標准溶液(10μg/mL)0.5mL、1.0mL、1.5mL、2.0mL分別置于10mL試管中,補水至2.0mL,配制成VC標准樣品工作液。再分別加入5mL鄰苯二胺(OPDA)溶液,搖勻避光靜置60min,即配制成VC標准樣品待測液。

标准樣品待測液制備步驟如下圖所示:

熒光分光光度法在食品中維生素C含量測定上的應用

图3 ?VC标准空白溶液待测液和VC标准系列溶液待测液配制流程图


·?測定結果

熒光分光光度法在食品中維生素C含量測定上的應用

熒光分光光度法在食品中維生素C含量測定上的應用

式中:

X——試樣中維生素C的含量,單位爲毫克每百克(mg/100g);

V——試樣的定容體積,單位爲毫升(mL);

c——由標准曲線查得的試樣測定液中維生素C的質量濃度,單位爲微克每毫升(μg/mL);

m——試樣的質量,單位爲克(g);

f——試樣稀釋倍數。

?

·?結論

采用熒光分光光度法測定食品中維生素C含量,操作簡單,方法准確,是一種理想的方法。

由于維生素C本身易光解而且在測定過程中需要對每一種樣品進行樣品的背景扣除,因此,此實驗對儀器的功能要求更高。港東F-380型熒光分光光度計率先在硬件上采用了激發側擋光快門的設置,從而避免了樣品被強光的直接照射;軟件上采用了獨特的雙背景扣除功能,自動計算維生素C濃度,使整個實驗操作簡便,結果重現性良好。



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