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熒光分光光度法在黃曲黴毒素含量測定上的應用

日期: 2017-08-09
浏覽次數: 1014
案例名稱: 熒光分光光度法在黃曲黴毒素含量測定上的應用

摘要:?熒光分光光度法是對熒光物質進行定性和定量的有效方法。目前國家標准對于測定食品中黃曲黴毒素含量的方法以免疫親和層析法爲主,其中熒光分光光度法是一個比較常用的方法。

本文依据国家标准G B/T 18979-2003《食品中黄曲霉毒素的测定 免疫亲和层析净化高效液相色谱法和荧光光度法》和G B 5413.37-2010《乳和乳制品中黄曲霉毒素M 1的测定》中的亲和免疫层析净化荧光光度法,应用港东F-380型荧光分光光度计对食品中黄曲霉毒素含量进行测定。结果证明此方法操作简便,线性良好是测定食品中黄曲霉毒素含量的理想方法。

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關鍵詞: ?荧光分光光度法 ?黄曲霉毒素 ?免疫亲和层析 ?食品 ?乳品

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· 原理

试样经过甲醇-水提取,提取液经过滤、稀释后,滤液经过含有黄曲霉毒素特异的免疫亲和层析净化,此抗体对黄曲霉毒素B 1 、B 2 、G 1 、G 2 、M 1 具有专一性,黄曲霉毒素交联在层析介质中的抗体上。用水将免疫亲和柱上杂质除去,以甲醇通过免疫亲和层析柱洗脱,加入溴溶液衍生,以提高测定灵敏度 。 洗脱液通过荧光光度计测定黄曲霉毒素(B1+B2 +G1 +G2)总量及黄曲霉毒素M1的量。

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·?實驗條件

儀器及附件:

天津港东 F-380 型荧光分光光度计

熒光石英比色皿


分析條件:

激發波長:360nm

發射波長:450nm

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藥品:?

樣品前處理試劑:甲醇(色譜純)、氯化鈉、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉、氯化鉀;

樣品衍生溶液:溴溶液儲備液(0.01%)、溴溶液工作液(0.002%);

標准校正溶液:二水硫酸奎甯、硫酸;

黄曲霉毒素标准品:B 1 、B 2 、G 1 、G 2 、M 1。

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其它:?

分析天平(0.0001g)、三角瓶、容量瓶、高速均质器(18000r/min~22000r/min)、定量滤纸、移液管、玻璃注射器、黄曲霉毒素免疫亲和柱(B 1 、B 2 、G 1 、G 2 总量柱和M 1柱)、空气压力泵、离心机(转速≥7000转/分钟)、玻璃试管等。


·?樣品及標准樣品的制備

樣品的提取:

(1)樣品提取流程圖

熒光分光光度法在黃曲黴毒素含量測定上的應用

(2)樣品提取流程圖對應各實驗環節加入溶液的量

熒光分光光度法在黃曲黴毒素含量測定上的應用

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免疫親和層析淨化:

(1)免疫親和層析淨化流程圖

熒光分光光度法在黃曲黴毒素含量測定上的應用

(2)免疫親和層析淨化流程圖對應各實驗環節加入溶液的量

熒光分光光度法在黃曲黴毒素含量測定上的應用

標准樣品待測液制備

(1)國標方法

在激發波長360nm,發射波長450nm條件下,以0.05mol/L硫酸溶液爲空白,調節熒光光度計的讀數值爲0.0μg/L;以熒光光度計溶液校准溶液(硫酸奎甯溶液)調節熒光光度計的讀數值爲20.0μg/L(乳和乳粉中讀數值爲2.0μg/L)。

(2)標准曲線法

用苯-乙腈(98+2)溶液配制黃曲黴毒素標准溶液0.100mg/mL(100μg/mL),分別准確吸取黃曲黴毒素標准溶液0.5mL、1.0mL、1.5mL、2.0mL分別置于10mL容量瓶中,用苯-乙腈(98+2)定容,配制成濃度爲5.0、10.0、15.0、20.0μg/mL的黃曲黴毒素標准曲線工作液。


·?測定結果

應用F-380型熒光分光光度計的“光度測定”模塊建立黃曲黴毒素的標准工作曲線,並進行樣品測定。

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·?結論

采用熒光分光光度法測定食品中黃曲黴毒素含量,操作簡單,方法准確,是一種理想的方法。

應用免疫親和層析淨化熒光分光光度法,建立黃曲黴毒素標准工作曲線所測試的數據比免疫親和層析淨化熒光光度法,硫酸及硫酸奎甯溶液校正黃曲黴毒素含量所得到的數據更加准確。



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